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    培養Marc-145細胞接種PRRSV總結
    時間:2021-10-29 17:04:27
    一、實驗背景:
            用BioWill™SUS-50L生物反應器培養Marc-145細胞并接種PRRSV,檢測毒價
    二、培養條件(實際操作中的控制參數)
    設備型號:BioWill™SUS-50L生物反應器   
    紙片載體:800g
    細胞接種量:8*10E9 cells(9個10L轉瓶的細胞)
    1、細胞生長液:DMEM+8%FBS+1%PS
    細胞生長期DO:50%
    細胞生長期pH :7.2
    細胞生長期T:37℃
           培養時間:96h
    2、接種藍耳病毒培養
    細胞維持液:DMEM(高糖)+2%FBS+1%PS
    病毒繁殖生長期DO:60%
    病毒繁殖生長期pH:7.4
    病毒繁殖生長期  T:35℃
           接毒量:TCID50為6.5的種毒1000ml,MOI:
           培養時間:48h
    三、簡述培養過程
    接種/培養過程:打出罐內浸泡電極和紙片載體的無菌PBS,打入培養基40L,調節合適參數,預培養24h做無菌檢驗。接種種細胞,并測原始糖濃度;接種后每24h測糖,48h時開始每天換液來維持細胞生長,根據耗糖量進行換液量。
    接毒/培養過程:將培養基打出,然后將含2%血清的培養基40L打到反應器中并加熱到35℃,TCID50為6.5的種毒1000ml反應器接毒,接毒24h后取樣測糖,根據實際情況補加糖和濃縮包。
    取樣/收毒過程:接毒24h取樣測糖、毒價,每隔2h取毒樣一次,每次取凍存2份;細胞病變脫落開始收毒凍融。
    四、培養的耗糖檢測:
         實驗數據如下:
    時間h 耗糖量g/d 耗堿量L/d 備注
    0 0 0 接種細胞
    24 40 0.35  
    48 93 0.79 換生長液30L
    72 116 1.56 換生長液40L
    96 140 1.81 換維持液40L,接毒1L
    120 157 2.24 補(2*DMEM+150g糖/瓶)1L
    144 146 1.96 補(2*DMEM+150g糖/瓶)0.7L
     
    耗糖曲線圖如下:
     
    耗堿曲線圖如下:
     
     
    五、總結與分析(出現的問題及解決方法)
    (一)結果
    接毒毒價檢測結果:
    時間
    (h)
    種毒 26 30 32 34 36 38 40 42 44 48
    滴度 6.5     7.37 7.9 8.5 8.03 7.0      
     
    注:   紅色數字為毒價最高點
     
    (二)分析
         1、整個培養過程共用:生長液110L,維持液40L,雙抗1.2L,谷氨酰胺1L,血清9.6L,濃縮液1.7L,堿8.71L,葡萄糖300g,收獲毒液45L,最高毒價在36h為8.5。
        2、本次使用的種毒毒價為6.5,最高毒價出現在36h,為8.5。病毒滴度顯著提高。
    3、本次反應器細胞準備期間,使用的為草原綠野特級新生牛血清,上罐前細胞狀態正常,耗糖正常,上罐后血清量為8%,維持液為2%。
     
    (三)問題及解決辦法    
        由于客戶工藝信息需要保密,故部分數據做刪除。

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