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    細胞培養常見問題及回答

    時間是:2021-10-15 06:25:00 點擊次數:467
     
    細胞培養常見問題及回答
     
    1. 谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎?它在溶液中不穩定嗎?
     
    L-谷氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有最終確定。L- 谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。
     
    2. 什么培養基中可以省去加酚紅?
     
    酚紅在培養基中被用來作為PH 值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養基。
     
    3. 用臺盼蘭計數活細胞?
     
    用無血清培養基把細胞懸液稀釋到 200-2000 個/毫升,在 0.1 毫升的細胞中加入 0.1 毫升的 0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻,數分鐘后,用血球計數板計數細胞?;罴毎懦馀_盼蘭,因而染成藍色的細胞是死細胞。
     
    4. 消除組織培養的污染?
     
    當重要的培養污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母, 把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺,檢查 HEPA 過濾器。
     
    高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B 和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。
     
    (1) 在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞,稀釋到常規細胞傳代的濃度。
     
    (2) 分散細胞懸液到多孔培養板中,或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度范圍內,把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素B 推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
     
    (3) 每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現空泡,匯合度下降和變圓。
     
    (4) 確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度 2-3 倍濃度的抗生素的培養液培養細胞 2-3 代。
     
    (5) 在無抗生素的培養基中培養細胞一代。
     
    (6) 重復步驟 4。
     
    (7) 在無抗生素的培養基中培養 4-6 代,確定污染是否以已被消除。
     
    7. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀?
     
    GIBICO 的胎牛血清 沒有預老化,儲存在 2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,避免反復凍融。


    8. 離子抑制胰蛋白酶活性嗎?使用胰蛋白酶時加入 EDTA 的目的是什么? 二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA 用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前,用 EDTA 清洗細胞,以消除來自培養基中所有的二價離子。
     
    10.胞培養的最適 PH 值和滲透壓是多少?
     
    生長培養基的PH 值對細胞的增值和病毒或重組蛋白的生產均會產生影響。對于大部分鱗翅類昆蟲細胞系, 在 PH 值 6.0-6.4 范圍的大部分應用效果良好。培養鱗翅類昆蟲細胞系時,培養基的最適滲透壓是 345-
    380mOsm/kg.。為保證可靠和持久的細胞培養方式,減少技術問題,保持 PH 值和滲透壓在以上所列的范圍之內。
     

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